Протягом останніх двох тижнів наші співробітники, професор Володимир Лущак, доцент Марія Байляк та науковий співробітник Ігор Юркевич, перебували з робочим візитом в університеті м. Тюбінген (Німеччина). Візит був здійснений у рамках спільного трилатерального українсько-російсько-німецького проекту “Клітинні механізми здорового старіння мозку при обмеженні калорійності їжі», фінансованого науковою фундацією Фольсваген. Цей трьохрічний проект був завершений у квітні 2019 року, проте отримав додаткове фінансування від фундації Фольсфаген для проведення подальших експериментів, які б дозволили чіткіше пояснити результати, отримані у ході виконання проекту.
Метою візиту було провести підбір умов для визначення рівня регуляторних білків (зокрема, Nrf2) методом вестерн-блоту у тканинах мишей, а також обговорити шляхи подальшої співпраці. Експерименти були проведені у лабораторії професора Роберта Файля, яка знаходиться в міжфакультетському інституті біохімії університету м. Тюбінген. Професор Файль та його колеги працюють у галузі клітинної біохімії, зокрема над вивченням функцій цГМФ-NO сигналінгу у мозку та інших органах за різних метаболічних порушень.
За консультативної допомоги професора Роберта Файля, постдока Сюзанни Файль та аспірантів Франка Реглера та Крітіки Ратджет, з використанням різних модельних об’єктів (тканин мишей, культур клітин, екстрактів плодових мух) та різних методичних умов не вдалось виявити наявність білків Nrf2 та Hif-1a у досліджуваних зразках методом вестерн-блоту, проте була виявлена одна з мішеней Nrf2 – гемоксигеназа 1 та маркерний білок – тубулін. Загалом, наші науковці освоїли протокол вестерн-блоту з напівмокрим переносом білків, дізналися про особливості проведення гель-електрофорезу, самого блоту, виявлення потрібних білків з використанням антитіл та хемілюлінесцентної детекції; ознайомилися з методикою фарбування та виявлення білків на гелі. Окрім гель-електрофорезу та вестерн-блоту, наші науковці також ознайомилися з іншими методами, які використовуються у лабораторії професора Файля. Зокрема, це отримання зрізів з пафафінованих тканин печінки з використанням кріомікротому (демонстрацію проводила аспірантка Крітіка Ратджет), а також препарування та виділення аорти з організму миші, отримання культур клітин з гладеньких м’язів аорти ( vascular smooth muscle cells) (демонстрацію експериментів провів аспірант Морітц Легнерс).
Окрім наукових досліджень, наші науковці мали змогу трохи познайомитися з особливостями лабораторного практикуму з клітинної біохімії для студентів університету. Лабораторні практикуми проводяться у невеликих групах (до 8 чоловік), щоб всі студенти могли окремо робити експерименти. Окрім викладачів, практикуми зі студентами проводять лаборанти та аспіранти. На практикумі студенти вивчають певну методику від А до Я, тобто вони здійснюють всі необхідні операції та кроки. Так, наприклад, методика по вестерн-блоту у студентів займає 4 дні: у перший день (2 год) вони готують гелі для форезу, на другий день (3 год) – готують проби та розраховують вміст білка у пробах, на третій день (4-5 год) – вони проводять гель-електрофорез, блотінг та інкубацію з первинними антитілами, а на четвертий день – інкубацію з вторинними антитілами, детекцію та аналіз результатів (2 год).
Загалом, поїздка була дуже пізнавальною та результативною.
